1、正交设计法优选蒲桃中总黄酮的提取工艺研究摘要：目的 利用正交设计法优选蒲桃中总黄酮的提取工艺。方法 以芦丁为对照品，以亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠为显色剂，用紫外分光光度法在510nm波长处测定总黄酮的含量。采用L9(34)正交实验设计，以蒲桃中总黄酮含量为考察指标，考察乙醇浓度、提取时间、料液比、提取温度4个因素对蒲桃中总黄酮的提取的影响。结果 蒲桃中总黄酮的最佳提取工艺为60%乙醇，70倍量，80，回流提取2h。结论 经试验证明，该提取工艺重复性好，结果准确可靠，易于操作，便于推广，对进一步的工艺开发和蒲桃中总黄酮的研究有较好的参考价值。关键词：蒲桃；总黄酮；正交实验；紫外-可见分光光度法1
2、1Study on Extraction Technology of Total Flavonoids in Syzygium jambos (L.) Alston by Orthogonal DesignAbstract: Objective To optimize extraction technology of total flavonoids in Syzygium jambos (L.) Alston. Methods The ultraviolet spectrophotometry method was used to measure the total flavonoids c
3、ontent in ethanol extract of Syzygium jambos (L.) Alston with different polar solvent extraction, with sodium nitrite-aluminum nitrate-sodium hydroxide as color reagent and the rutin as standard substance and the maximum absorption wave-length of 510nm. By L9(34) orthogonal experimental design, with
4、 Syzygium jambos (L.) Alston, as index of total flavonoids were investigated ethanol concentration, extraction time, ethanol dosage and extraction temperature four factors on the extraction total flavonoids in Syzygium jambos (L.) Alston. Results The optimum extraction process total flavonoids in Sy
5、zygium jambos (L.) Alston was 60% ethanol, 70 times the amount of reflux extraction, 80, and 2h. Conclusion Proven by the experiment, the extraction technology is well reproducible, accurate and reliable, easy to operate and spread. It has a great reference value to further development of the techno
6、logy and the research of total flavonoids in Syzygium jambos (L.) Alston.Key words: Syzygium jambos (L.) Alston; total flavonoids; orthogonal experiment; UV-Vis spectrophotometry 11目 录摘要-1前言12仪器与材料32.1仪器32.2 药材与试剂33 方法43.1 蒲桃总黄酮含量测定方法43.2 方法学考察43.3 单因素考察方法53.4 蒲桃中总黄酮提取的正交试验64结果64.1方法学考察结果64.2单因素考察结果
7、94.3蒲桃总黄酮提取的正交试验优选结果125讨论135.1最大吸收波长的选择：135.2提取条件影响程度分析135.3显色反应分析146结论14参考文献15综述17致谢2411 前言蒲桃(Syzygium jambos (L.) Alston)为桃金娘科蒲桃属常绿乔木1，收载于广东省中药材标准(第一册)，又有名称为水蒲桃、响鼓、铃铛果、风鼓和香果等，有此名称，是因为其果实到成熟季节，会散发如玫瑰般的清新香味，同时果核可在果腔内随意滚动，摇动起来有响声。蒲桃原产于马来群岛、印度及我国的海南省，集中分布在亚洲热带地区，也有分布在亚洲亚热带至温带，以及大洋洲的部分地区。蒲桃在我国现在主要分布于海南
8、、台湾、广东、广西、福建、云南和贵州等地区，大半处于半野生状态2。蒲桃多生长在阴湿之地，喜光喜阴，喜温暖湿润的气候，因此常生长在小溪边或者低湿的沟谷里；耐肥沃耐涝，不耐贫瘠干旱，因此湿润且肥沃的土壤较适宜其生长。蒲桃作用繁多，来源广泛，资源甚多，且价廉易得。蒲桃的根系发达，且生长情况较好，因此具备强抗风性，同时还具有抗二氧化硫、抗氯气、抗机动车尾气、抗粉尘等功能，常用于园林绿化、防护植物。民间有将其采摘鲜食，有将其用于酿酒，有将其晒干制成凉茶。而在药用方面，其作用也是不容小觑的，蒲桃的药用部位包括叶、干燥茎、种子、花和果实。据相关资料研究记载，蒲桃叶和花捣烂可以用来治疗痘疮，果实浸酒有安胎、止
9、呕之功效，种子可促进胰岛细胞再生而起降血糖作用，茎的药效为温中散寒、温肺止咳、降逆止呕，可用治疗胃寒呃逆、肺虚寒咳等证3-6。现代药理学研究表明蒲桃茎提取物具有抗菌7,8、抗炎、镇痛9、降血糖10和抗氧化11等作用，在临床应用中对于金黄色葡萄球菌感染、皮肤炎症疼痛、糖尿病等病症的治疗具有广阔前景。黄酮类化合物是广泛存在于自然界的一大类天然有机化合物，是植物在长期自然选择过程中产生的一类次生代谢产物，是在体内主要由莽草酸途径和乙酸-丙二酸途径生物合成的一类产物。目前，黄酮类化合物泛指两个苯环通过三个碳原子相互联结形成的一系列化合物，它分布广泛，主要存在于高等植物及羊齿植物的根、茎、叶、花、果实等
10、中，其中以被子植物分布最多。黄酮类化合物在植物体内大半以与糖结合成为苷类的形式存在，少部分以游离形式存在。黄酮类化合物具有许多重要的生理、生化作用清除生物体内的自由基，具有抗氧化作用12，具有抗肿瘤、调血脂、抑制血小板聚集、抗动脉粥样硬化、抗骨质疏松等各种作用13-16。黄酮类化合物的这些生理活性在抗衰老和预防治疗人类的肿瘤、心血管病等疾病这些方面具备重要意义。正交设计法是研究多因素多水平的一种设计方法，是试验优化的一种常用技术。正交设计法建立在概率论、数量统计之上，运用排列整齐的正交表安排试验方案，再经过综合比较和对试验结果的统计分析，达到减少试验次数而能快速获得最优试验方案的目的。正交设计
11、法设计简单可行，数据点分布均匀，可减少不必要的人力物力财力等资源的浪费，在现代制备工艺和提取工艺的研究中应用广泛17。 在对蒲桃的研究中，与生理特性、栽培技术、引种情况、物种比较等方面相关的比较多，虽然已有文献报道了蒲桃属植物中总黄酮的提取工艺研究，但其中以蒲桃叶居多，具体到蒲桃茎提取工艺优化研究仍是甚少。张亮亮18等人研究确定了海南蒲桃叶中黄酮的最佳提取条件为：乙醇体积分数70%，料液比1:20，提取温度80，提取时间3h。由此可将其结果作为参考，对蒲桃茎中总黄酮的提取条件进行更进一步的研究。蒲桃在我国资源量巨大，用途众多，是值得大力开发的植物资源，且中草药的具体化学成分提取、研究与应用日益
12、受到重视，国内外开发中草药植物的力度也在不断加大。近年来，植物药以其天然低毒、来源丰富的特点倍受青睐，而黄酮类化合物更是以其广谱的生理、药理作用引人瞩目。因此，以黄酮类化合物为活性成分的植物药的开发、研究和加工越发受到科学家们的重视。作为石岐凉茶的成分之一的蒲桃，目前仍非常少以药物的身份出现在市面上，由此可见，随着该相关技术的日趋成熟，蒲桃中的黄酮类化合物的开发利用更具有广阔的前景。综上所述，蒲桃在我国资源丰富，药用层面利用却较少，本次实验研究可确定蒲桃茎中总黄酮的最佳提取条件，为科学研究蒲桃茎的药理作用、研发蒲桃相关药物新剂型、推广蒲桃药物的生产等提供可靠的数据。有效的提取方式是进行其他深层
13、研究的先决条件，本次研究有助于更进一步对蒲桃各相关资源进行开发利用。2 仪器与材料2.1 仪器 名称 来源UV1102紫外可见分光光度计KQ-500型超声波清洗器 CP225D型电子天平AUY型电子天平HH-S4数显恒温水浴锅 KQ3200DE型数控超声波清洗器UV1102紫外分光光度计GZX-9246MBE电热恒温鼓风干燥箱WS70-1型红外快速干燥器 DFY-300摇摆式高速万能粉碎机 上海天美科学仪器有限公司昆山市超声仪器有限公司德国Sartorius公司岛津（中国）有限公司金坛市医疗仪器厂昆山市超声仪器有限公司上海天美科学仪器有限公司上海博迅实业有限公司医疗设备厂巩义市予华仪器有限责任
14、公司 温岭市林大机械有限公司2.2 药材与试剂 名称 来源芦丁对照品蒲桃药材 乙醇亚硝酸钠硝酸铝 氢氧化钠超纯水批号100080-201409，中国食品药品检定研究院3批，由广东益和堂制药有限公司提供天津市富宇精细化工有限公司 天津市百世化工有限公司天津市科密欧化学试剂有限公司广州化学试剂厂实验室自制3 方法3.1 蒲桃总黄酮含量测定方法3.1.1 对照品溶液的的制备取芦丁对照品6mg，精密称定，置于20mL容量瓶，加70%乙醇溶液适量，振摇使其溶解，用70%乙醇溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液，芦丁浓度为0.3080mg/mL。同法配制对照品储备液，芦丁浓度为2.920mg/mL。3.
15、1.2 供试品溶液的制备取蒲桃粉末(过三号筛)1.0g，精密称定，加70%乙醇溶液70mL，加热回流提取2h，提取液趁热过滤，滤液蒸干，残渣加70%乙醇溶液溶解，转移至25mL量瓶中，加70%乙醇溶液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。3.2 方法学考察3.2.1 线性关系考察精密量取对照品储备液I0.5、1.0、1.5、2.0和2.5mL，分别置于10mL容量瓶中，加入5%亚硝酸钠溶液0.5mL，6min后，加入10%硝酸铝0.5mL，6min后，再加入4%氢氧化钠5mL，加入70%乙醇溶液定容至刻度，摇匀，放置15min，作为对照品系列溶液，以不含芦丁的空白溶液为参比，于510nm波长处测定吸光度，以对照品浓度(X)为横坐标，相应对照品吸光度(Y)为纵坐标，绘制浓度-吸光度标准曲线。3.2.2 精密度试验取蒲桃粉末(过三号筛)1.0g，精密称定，按“3.1.2”项下方法，制备供试品溶液，精密量取供试品溶液2mL，按“3.2.1”项下方法操作，测定其吸光度，重复6次，分别测定其吸光度，计算吸光度的RS
