1、蒲地蓝消炎片中板蓝根有效成分(R,S)-告依春含量测定方法的研究摘要：目的 建立蒲地蓝消炎片中(R,S)-告依春成分提取及含量测定的方法。方法 本论文采用的提取方法是超声法。提取溶液选择甲醇，体积为25ml，时间30min。采用的测定方法是高效液相色谱法。以(R,S)-告依春为对照品，以甲醇-0.02%磷酸溶液（7：93）为流动相，流速为0.8ml/min在242nm波长处测定RS-告依春的含量。结果 通过高效液相色谱法测得蒲地蓝消炎片中(R,S)-告依春的含量。结论 本方法快速简便，重复性好，专属性强，可用于蒲地蓝消炎片(R,S)-告依春含量的检测方法。关键词：蒲地蓝消炎片；(R,S)-告依
2、春；高效液相色谱法；含量测定IA research for the measurement method of the (R,S)-epigoitrin content within theisatidis radix of Pudilan xiaoyan TabletsAbstract: Objective To establish the method of extraction and method of active ingredient (R,S)-epigoitrin from Pudilan xiaoyan Tablets. Method In this paper,the me
3、thod of ultrasonic were used for extraction.HPLC was used for measurement. 25ml of 20Methanol was used as extract solutions for 30 minutes. Whit the comparison of (R,S)-epigoitrin,and the Methanol:0.02%Phosphoric acid solution(7:93)the mobile phase and the flow rate was 0.8ml/min,the content of (R,S
4、)-epigoitrin was detected in 242nm wavelength.Results By high performance liquid chromatographymethod determinationofPudilan Xiaoyan tablets(R,S)- epigoitrincontent.Conclusion The method is simple,accurate,rapid and with good reproducibility.It could be used in the detection of the content of (R,S)-
5、epigoitrin within Pudilan xiaoyan Tablets.Keywords: Pudilan xiaoyan Tablets；(R,S)-epigoitrin；HPLC；Determination of content 目 录摘要I-1 前言11.1蒲地蓝消炎片及板蓝根概况11.2（R,S）-告依春的研究21.3本论文研究的意义22 材料与仪器32.1 试剂与试药32.2 仪器33 方法43.1（R,S）-告依春含量测定方法43.2方法学考察43.3 单因素考察方法73.4 结果94 讨论94.1 提取条件分析134.2测定条件分析105 结论11参考文献11综述13
6、致谢211 前言1.1蒲地蓝消炎片及板蓝根概况蒲地蓝消炎片由黄芩、蒲公英、苦地丁、板蓝根组成，具有清热解毒，抗炎消肿的功效，主要用于治疗疖肿、淋巴腺炎、腮腺炎、咽炎、扁桃体炎等，广谱抗菌，抗病毒、抗炎症、增强肌体免疫力功能及调节能力、有助于感染性疾病的治疗。据文献报道，复方中黄芩所含的黄酮类成分蒲公英所含的咖啡酸、绿原酸以及板蓝根所含的腺苷和(R,S)-告依春可能是该制剂的主要活性成分。国家药品标准( 试行)YBZ12702005中以测定蒲地蓝消炎片中黄芩苷的含量为其质量控制指标;蒲地蓝消炎片中咖啡酸、绿原酸的含量测定方法也已均有相关的文献报道，在蒲地蓝消炎片中起重要作用的板蓝根药材只有关于腺
7、苷的含量测定方法1-5。板蓝根为十字花科植物菘蓝的干燥根，具有凉血利咽、清热解毒等功效，临床上常用于病毒及细菌感染性疾病，尤其在抗病毒方面疗效确切6，在蒲地蓝消炎片中是不可或缺的重要成份。传统中医理论认为“热毒”是由火热旺盛所致，多数体现在温热病和热毒炽盛症，都为里热。中医临床中的“里热证”主要包括现代医学的多种急性传染、感染性的热性疾病。清热解毒药的药理作用主要有以下几个方面: 抗病原微生物作用; 抗细菌内毒素作用; 抗炎作用; 对免疫功能的影响。板蓝根是清热解毒类中药的代表，其药理作用和药效物质研究也多集中在这几个方面。主要用于治疗温毒发斑、舌绛紫暗、烂喉丹痧等疾病。菘蓝根含靛蓝（indi
8、gotin，indigo），靛玉红（indirubin），蒽醌类、-谷甾醇（-sitosterol），-谷甾醇（-sitosterol）以及多种氨基酸：精氨酸（arginine），谷氨酸（glutamic acid），酪氨酸（tyrosine），脯氨酸（proline），缬氨酸（valine），-氨基丁酸（-aminobu-tyric acid）。还含黑芥子甙（sinigrin），靛甙（indoxyl-hlucoside），色胺酮（trptanthrin），1-硫氰酸-2-羟基丁-3-烯（l-thiocyano-2-hydroxy-3-butene），（R,S）-告依春（epigoitrin）
9、，腺甙（adenosine），棕榈酸（palmitic acid），蔗糖（sucrose）和含有12%氨基酸的蛋白多糖。 现代药理学研究表明,板蓝根抗病毒作用的有效部位为总生物碱,并从中分离得到有效单体成分（R,S）-告依春。随着人们对板蓝根中抗病毒活性成分进行越来越多的研究,已经证明（R,S）-告依春为板蓝根抗流感病毒的有效成分之一。1.2（R,S）-告依春的研究 最新版的中国药典2010年版一部中对于板蓝根药材的质量控制是（R,S）-告依春成分的含量测定1，可见（R,S）-告依春是板蓝根药材中的主要成分。过去认为靛蓝、靛玉红等成分为板蓝根抗病毒的有效成分，但现有的研究表明靛蓝、靛玉红没有抗
10、病毒活性，而（R,S）-告依春等成分具有显著的抗病毒活性，故（R,S）-告依春的含量是反映板蓝根颗粒质量的一个重要指标6。近年来国内外对板蓝根的清热解毒功效物质及机制日益增多。如研究板蓝根水提物、醇提物、总生物碱可知其具有较强抗流感病毒作用，且作用强度相近; 靛玉红无抗流感病毒作用，喹唑二酮略有抗流感病毒作用，（R,S）-告依春及总生物碱提取物有明显的抗流感病毒作用且二者作用强度相当7。吴静等2采用加水水浴加热提取法提取板蓝根流浸膏中的（R,S）-告依春，并通过HPLC法测定（R,S）-告依春的含量。确定最佳条件为：提取时间为30min，提取温度为80，水量：50ml，流动相：甲醇0.02%磷
11、酸（7:93），检测波长：245nm，色谱柱：Agilent XDB-C18 150mm，进样量：10uL。范春芳等3采用超声提取法提取板蓝根颗粒中（R,S）-告依春，并通过HPLC法测定（R,S）-告依春的含量。确定最佳条件为：提取时间为30min，水量：25ml，流动相：乙腈0.1磷酸水=1090，检测波长：245nm，柱温：30色谱柱：Hypersil ODS2 柱（250mm4.6 mm，5 m），进样量：10uL，流速：1.0 ml/min。中成药成分的定量检测方法主要有：HPLC法、可见分光光度法、和紫外分光光度法等。HPLC是目前中成药含量测定应用尤为广泛的一种检测方法。本论文采
12、用HPLC测定法测定（R,S）-告依春的含量8-9。1.3本论文研究的意义 为完善药品的质量控制，本文参考相关文献资料，采用高效液相色谱法对蒲地蓝消炎片中（R,S）-告依春成分进行定性定量分析，建立蒲地蓝消炎片中(R,S)-告依春成分提取及含量测定的方法，以期为蒲地蓝消炎片中板蓝根的质量控制提供参考依据。2 材料与仪器2.1 试剂与试药(R,S)-告依春对照品中国食品药品检定研究院，批号：111753-201304板蓝根对照药材中国食品药品检定研究院，批号：121177-201105蒲地蓝消炎片1锦州本天药业有限公司（万通）蒲地蓝消炎片2云南白药集团股份有限公司（云丰）蒲地蓝消炎片3云南龙发制
13、药有限公司（雁塔）蒲地蓝消炎片4天津药业集团新郑股份有限公司（修正药业）蒲地蓝消炎片5武汉双龙药业有限公司（双龙）蒲地蓝消炎片6甘肃岷海制药有限责任公司（岷州）蒲地蓝消炎片7安徽济人药业有限公司（药信）流动相甲醇德国默克，色谱纯,批号：2017/01/28溶剂甲醇广州化学试剂厂，AR,批号：20140302-2磷酸天津市大茂化学厂，AR,批号：20100302超纯水实验室自制2.2 仪器KQ-250DE型数控超声波清洗器昆山市超声仪器有限公司UV2401PC紫外可见分光光度计日本岛津公司CP225D十万分之一电子天平德国Sartorius公司CP224S万分之一电子天平德国Sartorius公
14、司HWS26型电热恒温水浴锅上海一恒科技有限公司电热鼓风恒温干燥箱上海讯能电热设备有限公司中药粉碎机温岭市林大机械有限公司LC-20AT高效液相色谱仪日本岛津公司3 方法3.1（R,S）-告依春含量测定方法3.1.1 色谱条件色谱柱：COSMOSIL nacalai tesque The quality for certainty 38020-41 5C18-MS-II 4.6ID250MM；流动相：甲醇-0.02%磷酸溶液（7：93）；流速0.8ml/min；检测波长：242nm；柱温：30； 进样量：20l。理论塔板数按RS-告依春峰计算不低于4000，(R,S)-告依春峰与相邻峰的分离度
15、不低于1.5。3.1.2对照品溶液制备精密称取RS-告依春对照0.01014g置100ml,加甲醇溶解稀释到刻度作为储备液。3.1.3供试品溶液制备 取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，精密称取约3片重，至具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，精密称定，加冰袋超声处理（功率400W，频率40KH在）30min，取出，放冷，精密称定，用甲醇补足缺失的重量，摇匀，过滤，用0.45m微孔滤膜过滤。3.1.4对照药材制备精密称取板蓝根对照药材约0.5g，精密加入甲醇25ml，密塞，精密称定，加冰袋超声处理（功率400W，频率40KH在）30min，取出，放冷，精密称定，用甲醇补足缺失的重量，摇匀，过滤，用0.45m微孔滤膜过滤。3.2方法学考察3.2.1线性关系考察取3.1.2对照品溶液，按不同比例加甲醇
